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禽传染性支气管炎病毒检测试剂盒

描述:禽传染性支气管炎病毒检测试剂盒适用于禽支气管炎病毒检测,可用于临床禽支气管炎病毒感染的辅助诊断,但不作确诊使用。

更新时间:2024-07-04
产品型号:50T
厂商性质:生产厂家
详情介绍
  一、禽传染性 支气管炎病毒检测试剂盒
  二、通用名称:禽传染性支气管炎病毒检测试剂盒(实时荧光PCR法)
  三、包装规格 50T/盒
  四、预期用途:
  适用于禽支气管炎病毒检测,可用于临床禽支气管炎病毒感染的辅助诊断,但不作确诊使用。
  五、禽传染性支气管炎病毒检测试剂盒原理:
  针对禽支气管炎病毒基因组高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含禽支气管炎基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
 
检验方法
1. 
试剂准备(试剂准备区)
(1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
(2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数(1T)+阳性对照数(1T)+误差预留量(1T)+样本数
单反液配制表(每份)
RT-PCR反应液
15.0 μL
逆转录酶
 2.0 μL
Taq酶
 3.0 μL
 (3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
2.样本准备(样本处理区)
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
 在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。
4. PCR(PCR扩增区)
(1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。
(2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

反应体积
25 μL
通道选择
FAM通道采集禽白血病病毒荧光信号
PCR
反应
条件
步骤
条件
循环数
反转录
    42℃:10分钟(min)
1
预变性
95℃:3分钟(min)
1
预扩增
95℃:5秒(s)
5
55℃:40秒(s)
PCR扩增
95℃:5秒(s)
40
55℃:40秒(s)
(此阶段结束时采集荧光信号)
 
注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择       None。

   【参考值(参考范围)】
1.试剂盒有效性判定:
(1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
(2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。
2.标本结果判定:
(1)阳性:标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
(2)可疑:标本检测结果Ct值在35~38范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在35~38范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。
(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。

【检验结果的解释】
通道及检测结果
标本检测结果解释
FAM
+
标本中检出禽白血病病毒RNA
-
标本中未检出禽白血病病毒 RNA

【检验方法的局限性】
1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的检出限shi可能会发生假阴性的结果。
2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。
3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染,则容易得到假阳性结果。

【产品性能指标】 
产品的检出限为102 Copies/mL,产品CV值≤5%。
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