玉米内源基因zSSIIb 核酸检测试剂盒（荧光 PCR法）

【产品名称】

商品名称：玉米内源基因 zSSIIb 核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

Name：Diagnostic Kit for zSSIIb Gene DNA（Real-Time PCR Method）

【包装规格】25T/盒、50T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测转基因植物的 zSSIIb基因，用于筛查待检测植物中是否含有 zSSIIb成分。其检测结果 仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，用国家标准的zSSIIb特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR技术对 zSSIIb的 DNA进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。

【试剂组成】

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用

【储存条件及有效期】

，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 次，有效期 个月。

【适用仪器】

ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量 PCR 检测仪。 【标本采集】

称取200g 样品。

【保存和运输】

采集或处理好的样品在 2^∘C ∼ 8^∘C条件下保存应不超过 ；若需长期保存，应放置 −70^∘C 以下保存，冻融不超过3次。

【使用方法】

样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

固体样本：用粉碎机或冷冻研磨仪将样品研磨至细粉状。

1.2 核酸提取

推荐采用核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。

试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满 份，多配制份 ，每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到 PCR反应管中，20μL/管。

3. 加样（样本处理区）

将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（QuencherDye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX参比荧光，选择None即可。

4.3 推荐循环参数设置：

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析ABI7500仪器为例）

反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline的Start值、End值以及 Threshold 值（用户可根据 实际情况自行调整， 值可设在～ 、 值可设在 ～ ，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analyze自动获得分析结果。

5.2 结果判断

阳性：检测通道 值 ，且曲线有明显的指数增长曲线；

阴性：样本检测结果无 值，且无特异性扩增曲线；

可疑：样本检测结果35<Ct值≤40，建议重复检测，如果检测通道仍为35<Ct值≤40，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性。

5.3 质控标准

阴性质控品：无特异性扩增曲线或无Ct值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且 值 ；

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

6. 检测方法的局限性

1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

6.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阻性或定量检测不准确的结果

7.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行；

试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完quan混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。