技术文章
TECHNICAL ARTICLES猪瘟病毒间接ELISA抗体试剂盒
【兽用名称】
通 用 名 猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒使用说明
商 品 名 无
英 文 名 Indirect ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus
汉语拼音 Zhuwenbingdu Jianjie ELISA Kangti Jiance Shijihe
【主要组分与含量】
组分 | 含量 | 含量 | 含量 |
(1)抗原包被板 | 1板 | 2板 | 5板 |
(2)阳性对照 | 1ml*1(蓝盖) | 1.5ml*1 | 2ml*1 |
(3)阴性对照 | 1ml*1(红盖) | 1.5ml*1 | 2ml*1 |
(4)酶标记物 | 11ml*1(绿盖) | 25ml*1 | 60ml*1 |
(5)样品稀释液 | 25ml*1(蓝盖) | 50ml*1 | 150ml*1 |
(6)20倍浓缩洗涤液 | 25ml*1 (黄盖) | 50ml*1 | 150ml*1 |
(7)底物显色液 | 11ml*1(棕盖) | 20ml*1 | 50ml*1 |
(8)终止液 | 6ml*1 (红盖) | 11ml*1 | 26ml*1 |
(9)血清稀释板 | 1板 | 2板 | 5板 |
(10)说明书 | 1份 | 1份 | 1份 |
【作用与用途】 用于检测猪瘟病毒抗体。
【注意事项】
(1)实验前,将试剂盒取出置25℃±3回温,至少30分钟,实验完成后置2~8℃保存。
(2)若试剂盒阴阳性对照、酶标记物出现少量悬浮物,属正常现象。
(3)请在试剂盒规定的有效期内使用;禁止非同批试剂盒混用。
(4)没有用完的抗原包被板应贮存在密封塑料袋内,置2~8℃存放。
(5)避免底物液暴露于强光,避免接触氧化剂。
(6)浓缩洗涤液用蒸馏水或纯水稀释,如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
(7)严格按照操作程序,仔细的吸液、计时,充分洗涤,对于获得精确的结果是非常必要的。
(8)使用样品稀释板将所有待检血清稀释好,再进行检测。
【用法与判定】
1 用法
1.1 样品准备 取动物全血,4000r/min离心10分钟,收集上清。或采集血液,待凝固后自然析出血清。血清清亮,无溶血。
1.2 样品稀释 将待检血清样品在样品稀释板中按1:40的比例稀释(例如:在样品稀释板中先加入195μl样品稀释液,加5μl待检血清。不同的样品要注意换吸头。样品在稀释过程中要充分混匀。阴性、阳性对照不稀释,直接使用。
1.3 洗涤液配制 20倍浓缩洗涤液使用前应恢复至室温(20~25℃),然后用蒸馏水或纯水作10倍稀释,混匀(例如:10ml的浓缩洗涤液加上90ml纯水)。
1.4 操作步骤
1.4.1 取抗原包被板(根据样本多少,可拆开分次使用),每孔加入稀释好的样本100μl;另外设阳性对照、阴性对照各2孔,100μl/孔。置37℃孵育30分钟。
1.4.2 弃去板中液体,每孔加入稀释好的洗涤液300µl,弃掉孔中洗涤液,重复洗涤5次,拍干。
1.4.3 每孔加入100μl酶结合物,轻微振荡混匀。置37℃孵育30分钟。
1.4.4 弃去板中液体,洗涤5次,方法同1.4.2。
1.4.5 每孔加底物显色液100µl,室温(20~25℃)避光显色10分钟。
1.4.6 每孔加终止液50µl。10分钟内用酶标仪测定并记录各孔在450nm波长处的吸光度(OD)值(测定前轻轻振匀,勿溢出)。
2 判定
2.1 成立条件 在酶标仪上测各孔的OD450nm值。试验成立的条件是:阴性对照孔平均OD450nm值应<0.5,阳性对照孔平均OD450nm值应>0.5。
2.2 判定标准
S为样品孔OD450nm值,P为阳性对照孔平均OD450nm值,计算样品S/P值。
若S/P值≥0.2时判为阳性;若S/P值<0.2时判为阴性。
【规格】 96孔/盒或192孔/盒或480孔/盒
【贮藏与有效期】 2~8℃保存,有效期为12个月。
仅供科研使用