小反刍兽疫病毒检测试剂盒的检验方法主要包括病毒分离培养和鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、荧光定量PCR、抗体ELISA检测、琼脂凝胶免疫扩散试验以及胶体金试剂卡检测。
1.病毒分离培养和鉴定
病毒分离:采集病料如眼睑下结膜分泌物、鼻腔分泌物、颊部、直肠黏膜拭子等,接种至羊肾原代细胞或VERO细胞中培养。
病毒培养:将处理过的样品接种到已形成良好单层的细胞中,置于37℃吸附1小时,倾去接种液,加入维持液后继续培养,逐日观察细胞变化。
病毒鉴定:通过观察细胞病变情况,如细胞变圆、集合等现象,结合病毒中和试验进行阳性判定。
2.聚合酶链式反应(PCR)
引物设计:使用特定的上下游引物进行PCR扩增。
扩增程序:经过一系列温度循环后,通过电泳分析PCR产物,若在特定位置出现特异性扩增条带则判为阳性。
3.荧光定量PCR
引物和探针:使用特异性引物和荧光探针。
结果判定:根据扩增曲线和Ct值判断样品是否为PPRV阳性。
4.抗体ELISA检测
原理:采用阻断ELISA方法原理进行检测。
操作:严格按照商品说明书操作和判断结果。
5.琼脂凝胶免疫扩散试验
操作步骤:取血清样品与标准血清、抗原分别加入琼脂板的孔中,静置后移入湿盒内室温反应。
结果判定:根据沉淀线的出现与否及其与阳性对照的关系判断结果。
6.胶体金试剂卡检测
操作方法:使用商品化的胶体金试剂卡,按照说明书进行操作和判断。
