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产品简介
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【产品名称】转基因植物NPTII基因PCR试剂盒
【包装规格】 50T/盒
【产品方法】实时荧光PCR法
【预期用途】
适用于检测,可用于临床转基因植物NPTII基因感染的辅助诊断,但不作确诊使用。
转基因植物NPTII基因PCR试剂盒【检验原理】
本试剂盒采用TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对转基因植物NPTII基因特异性引物,结合一条特异性探针,利用相应仪器对PCR 过程进行实时监测,实现检测结果的定性分析,用于临床上对可疑感染者的病原 学诊断。
【主要组成成份】
反应液、酶液、阳性质控品、阴性质控品。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输, 严禁反复冻融。
【使用方法】
1 样品处理(样本处理区)
1.1样本前处理
血液、体液和棉拭子样本取100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 核酸提取
推荐采用核酸提qu或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提qu,请按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;反应管 数每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 | RP反应液 | 酶液 |
用量(样本数为N) | 20μL | 1μL |
3.加样(样本处理区)
将步骤1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短 暂离心。
4.PCR 扩增(核酸扩增区)
4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR 仪反应槽内;
4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL; 荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。
4.3推荐循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
2.结果分析判定
2.1 结果分析条件设定设置Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像 调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop