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转基因水稻TT51-1(BT63)基因PCR试剂盒

描述:转基因水稻TT51-1(BT63)基因PCR试剂盒是上海臻科生物科技有限公司的产品,灵敏度好,准确性高,现货供应,欢迎广大新老客户前来选购。

更新时间:2024-07-04
产品型号:50T
厂商性质:生产厂家
详情介绍

【产品名称】转基因水稻TT51-1(BT63)基因PCR试剂盒

【包装规格】 50T/盒

【产品方法】实时荧光PCR法

【预期用途】

适用于检测,可用于临床转基因水稻TT51-1(BT63)基因感染的辅助诊断,但不作确诊使用。

转基因水稻TT51-1(BT63)基因PCR试剂盒【检验原理】

本试剂盒采用TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对转基因水稻TT51-1(BT63)基因特异性引物,结合一条特异性探针,利用相应仪器对PCR 过程进行实时监测,实现检测结果的定性分析,用于临床上对可疑感染者的病原 学诊断。

【主要组成成份】

反应液、酶液、阳性质控品、阴性质控品。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输, 严禁反复冻融。

【使用方法】 

1 样品处理(样本处理区)

1.1样本前处理 

血液、体液和棉拭子样本取100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2 核酸提取

推荐采用核酸提qu或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提qu,请按照试剂说明书进行操作。

2. 试剂配制(试剂准备区) 

根据待检测样本总数,设所需要的PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;反应管 数每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

RP反应液

酶液

用量(样本数为N)

20μL

1μL


将混合好的测试反应液分装到PCR 反应管中,21μL/管。

3.加样(样本处理区) 

将步骤1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短 暂离心。

4.PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR 仪反应槽内;

4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL; 荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。

4.3推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1cycle

95℃

10min

2

40cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

2.结果分析判定

2.1 结果分析条件设定设置Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像 调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

2.2 结果判断阳性:检测通道Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线; 可疑:检测通道 35值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35值≤38,且曲线有明显的增长曲线, 判定为阳性,否则为阴性; 阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

3.质控标准

 阴性质控品:Ct>38 或无 Ct 值显示; 阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

4.检测方法的局限性 

1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

2.样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

3.阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

4.病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

5.不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6.试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
7.本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行;

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完quan混匀并短暂离心;

3.反应液应避光保存;

4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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